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    Biochrom30+氨基酸分析儀氧化水解法檢測玉米胚芽粕中氨基酸

    2021-08-31

    Biochrom30+氨基酸分析儀氧化水解法檢測玉米胚芽粕中氨基酸

                                                  

    一、樣品前處理

    1、所用試劑

    必須使用重蒸餾水或與之等質的水(電導率<10μs)

    1、1          雙氧水,30%

    1、2          甲酸,98-100%

    1、3          苯酚:須重蒸

    1、4          偏重亞硫酸鈉

    1、5          氫氧化鈉

    1、6          鹽酸,ρ=1.18g/ml

    1、7          水解劑:6mol/l 的HCL,1L含1g苯酚:

    加1g苯酚(3.3)到492mL鹽酸(3.7)中,然后用水定容至1L

    1、8          20種氨基酸標準品

    行號

    氨基酸

    行號

    氨基酸

    1

    CYS-OX

    磺基丙氨酸

    2

    TAU

    牛磺酸

    3

    MET-SO2      

    蛋氨酸砜

    4

    ASP

    天冬氨酸

    5

    THR

    蘇氨酸

    6

    SER      

    絲氨酸

    7

    GLU

    谷氨酸

    8

    PRO      

    脯氨酸

    9

    GLY

    甘氨酸

    10

    ALA       

    丙氨酸

    11

    VAL       

    纈氨酸

    12

    MET

    蛋氨酸

    13

    ILE        

    異亮氨酸

    14

    LEU

    亮氨酸

    15

    NLE       

    正亮氨酸

    16

    TYR

    酪氨酸

    17

    PHE       

    苯丙氨酸

    18

    HIS

    組氨酸

    19

    LYS

    賴氨酸

    20

    ARG

    精氨酸

     

    2、標樣配置

       氨基酸混合標準儲備液:稱取上述各氨基酸標樣使用PH2.2的Load Buffer配置成2.5umol/L的儲備液備用。

      取氨基酸混合標準儲備液與PH2.2的Load Buffer以1:9的比例配置成0.25umol/L的標準液。

    3、前處理設備

    1)       天平

    2)       水解管

    3)       量筒

    4)       無油真空泵

    5)       干浴水解、濃縮儀

    6)       移液管

    7)       0.45um濾膜

    4、   樣品制備(參考歐盟飼料指令98/64/EC )

    1、樣品的準備

    粉碎樣品,通過0.5mm的篩孔。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質石油(3.12)脫脂。

    2、氧化

    從準備好的樣品中稱取約0.1~1克樣品,準確到0.2mg,于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中,稱取的樣品應該含有大約10mg氮,水分不能超過100mg。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃,加5ml氧化試劑(過甲酸苯酚),用帶彎頭的玻璃刮勺混合。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封,密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中,放置16小時。之后,從冰箱中取出,加0.84克偏重亞硫酸鈉(3.4)來分解過量的氧化試劑。

    3、水解

     加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應瓶放在烘箱中,溫度控制在110攝氏度,旋松帽子(防止玻璃瓶子破裂),水解1小時。然后快速旋緊瓶塞(戴手套和護眼罩)將其繼續在烘箱110攝氏度下水解23小時。

    4、加入內標并且調節pH值到2.20

        當水解反應結束后,將反應瓶從烘箱中取出,并且打開瓶口(戴手套和護目鏡)。冷卻后用定量加樣器準確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標準溶液,混合并且轉移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實驗燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調節到pH為正好2.20。

    轉移一部分溶液(不需要全部)到50毫升有蓋子的塑料瓶中。可以馬上測定或者放入冰箱等到分析的時候測定。

    二、分析方法描述(Biochrom 30+)

    氨基酸分析儀分析方法參數:

    1)       色譜柱:Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱,4.6′20cm

    2)       分離程序:

    NO.

    Time

    Temp

    Buffer

    Pump

    Nin

    Rec

    Commands

    1

    01:00

    53

    3

    35.0ml/h

    ON

    OFF


    2

    00:00

    53

    3

    35.0ml/h

    ON

    OFF

    Reset

    3

    03:30

    53

    3

    35.0ml/h

    ON

    OFF

    Load

    4

    15:45

    53

    1

    35.0ml/h

    ON

    ON


    5

    12:00

    58

    2

    35.0ml/h

    ON

    ON


    6

    02:00

    58

    4

    35.0ml/h

    ON

    ON


    7

    26:00

    92

    4

    35.0ml/h

    ON

    ON


    8

    04:00

    92

    6

    35.0ml/h

    ON

    ON


    9

    04:00

    92

    3

    35.0ml/h

    ON

    ON


    10

    14:00

    53

    3

    40.0ml/h

    OFF

    OFF


    11

    02:45

    53

    3

    35.0ml/h

    ON

    OFF


    End








     

    3)       運行時間:分析時間65min

    4)       反應單元溫度:135°C。

    5)       檢測波長:570nm、440nm同時檢測。

    三、外標法定量

    附、玉米胚芽粕分析圖譜

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