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    使用FLowCam研究——抗 PD-L1 單抗的質量控制

    2020-03-27

    PD-1/PD-L1分子是目前免疫檢查點領域倍受關注的靶點。截止 2017年底,美國食品藥品監督管理局(Food and Drug Administration,FDA)批準了3個PD-L1抗體,分別為羅氏的Atezolizumab、阿斯利康的Durvalumab和輝瑞/默沙東的Avelumab,適應癥包括非小細胞肺癌、 尿路上皮癌以及merkel細胞癌等少見癌種;國內也有10多家藥企布局了該靶點抗體的研發。使用流式顆粒成像分析法的FlowCam 8100可以幫助用戶對配方中的不溶性微粒進行檢測。

    FlowCam具備高靈敏度,高質量的顆粒圖像,精確的濃度檢測和直測粒徑等性能,從一次實驗結果中就能夠獲得“顆粒有多少”,“顆粒有多大”,“顆粒是什么”等信息。


    目的:研究建立抗程序性死亡受體配體 1(programmed cell death protein ligand 1,PD-L1)單抗的質量控制方法。

    方法:利用成像毛細管等電聚焦電泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)、肽圖對抗 PD-L1 單抗進行鑒別;利用還原 / 非還原十二烷基磺酸鈉毛細管電泳 (capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)、分子排阻高效液相色譜(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、離子交換高效液相色譜(ion exchange-high performance liquid chromatography,IEC-HPLC)對抗 PD-L1 單抗的純度進行控制;利用細胞結合抑制法和轉基因細胞法測定抗 PD-L1 單抗的活性;利用光阻法和液流成像分析法對不溶性微粒進行檢測和分析。

    結果:抗 PD-L1 單抗的 iCIEF 檢測結果具有特征性主峰,肽圖檢測具有相應特征峰,起到很好的鑒別作用。還原 CE-SDS 的輕鏈與重鏈峰面積之和的百分比為(98.37±0.21)%,非還原 CE-SDS 主峰峰面積百分比為(96.33±0.15)%;SEC-HPLC 單體的峰面積百分比為(99.43±0.02)%;IEC-HPLC 酸性區峰面積百分比、主峰峰面積百分比、堿性區峰面積百分比分別為(13.63±0.40)%、(80.00±0.36)%、(6.37±0.15)%。細胞結合抑制法與轉基因細胞法的活性檢測均呈現劑量反應曲線,反映抗 PD-L1 單抗劑量依賴性地阻斷程序性死亡受體 1(programmed cell death protein 1,PD-1)與 PD-L1 的結合及后續的生物學效應。光阻法檢測≥ 10 μm 及≥ 25 μm 的不溶性微粒數分別為(1.33±0.58)粒·mL -1 和(0.00±0.00)粒·mL -1 ;液流成像分析法檢測 2~10 μm、≥ 10 μm及≥ 25 μm 的微粒數分別為(1 243.67±242)粒·mL -1 、(45.67±16.07)粒·mL -1 和(10.00±5.00)粒·mL -1 ,其中,蛋白聚體占 87.45%,非蛋白聚體占 12.55%。

    圖 1 抗 PD-L1 單抗參比品(A)與樣品(B)的 iCIEF 代表圖譜


    圖 2  抗 PD-L1 單抗參比品(A)與樣品(B)的肽圖代表圖譜


    討論:研究建立了抗 PD-L1 單抗的多種質控方法,為國內抗 PD-L1 單抗的質量檢測提供了參考依據。

    郭莎,王開芹等,抗 PD-L1 單抗的質量控制研究,藥物分析雜志,2019,39(1):13-22

    Fluid Imaging Technologies(FlowCam)公司成立于1999年美國緬因州斯卡伯勒市,其研發并生產的FlowCam系列儀器是將流式細胞法組合到數字成像顯微鏡中,基于圖像分析法的流式動態成像顆粒分析儀,它使顆粒分析變得更快,更簡單。具有革新意義的FlowCam系列儀器被廣泛應用于研發和質量控制,應用涉及多個領域。

    流式顆粒成像分析系統FlowCam®8000系列具有以下優點。

    1.測量粒度和顆粒形狀-對每個顆粒成像后都可以獲得30多種形態學測量結果。

    2.快速提供具有統計意義的結果-用戶可在過程種觀察到每分鐘數以萬計的顆粒。

    3.提供*的成像質量和基于成像法的測量參數-可以看到快速和準確的,可由定量數據證明的檢測測量結果。

    4.自動化的,可建模的,具有統計學意義的 - 基于自動識別統計軟件 - 可將不同的顆粒進行分門別類,從而節省時間。

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